利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测

【摘要】血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是一种二聚体糖蛋白,由二硫键连接而成,是血小板衍生性生长因子(PDGF)家族的一员,具有促进毛囊发育和毛发生长的作用。为深入研究VEGF基因对毛囊的作用,本实验利用原核显微注射法制作VEGF164转基因小鼠,通过PCR筛选得到转基因阳性小鼠。通过实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠皮肤VEGFmRNA的相对表达量；通过WesternBlot检测VEGF蛋白的表达水平；通过石蜡切片的方法检测小鼠皮肤毛囊的数量和形态。1.利用原核显微注射技术制备转基因小鼠转基因小鼠是研究基因调控、个体发育和疾病的重要实验动物。原核注射技术在小鼠转基因中应用十分广泛而且非常成功,主要步骤包括外源基因的准备、原核期胚胎的获得、原核显微注射、胚胎移植等。本实验利用原核显微注射法制备了K14/VEGF和KAP6-1/VEGF转基因小鼠59只和87只,得到阳性小鼠各5只,阳性率分别为8.5%和5.8%,经过传代F0代阳性小鼠均能够把外源基因稳定遗传给子代。实验成功建立VEGF164转基因小鼠模型。2.K14/VEGF和KAP6-1/VEGF转基因小鼠的检测实验利用实时荧光定量PCR、Westernblot、石蜡切片等技术检测转基因阳性小鼠和同窝对照组小鼠。经检测,转基因阳性小鼠与同窝对照小鼠相比,VEGFmRNA表达量最高达6.25倍(K14/VEGF)和6.67倍(KAP6-1/VEGF),蛋白质表达量最高达1.68倍(K14/VEGF)和1.64倍(KAP6-1/VEGF),石蜡切片显示阳性小鼠毛囊直径和数量明显增加。表明血管内皮生长因子具有促进毛囊生长的作用。
【作者】张志鹏；
【导师】郭旭东；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】原核显微注射；转基因小鼠；血管内皮生长因子；毛囊；

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